Die bekannteste – und eleganteste – Geschichte verortet die Entstehung des Negroni im Jahr 1919 in Florenz. Graf Camillo Negroni, Stammgast im Caffè Casoni, bat den Barkeeper Fosco Scarselli, seinen üblichen Americano zu verfeinern, indem er die Soda durch Gin ersetzte. Der Barkeeper fügte außerdem eine Orangenscheibe anstelle einer Zitrone hinzu, um den Drink optisch zu unterscheiden. Das Ergebnis war so erfolgreich, dass Negroni schließlich selbst eine Brennerei gründete, um einen vorgemischten Gin unter seinem Namen herzustellen.
Diese Version ist durch genealogische Forschungen von Luca Picchi, dem Chef-Barkeeper des Caffè Giacosa in Florenz, belegt und in seinem Buch zusammengetragen. Sulle tracce del conte (2002), gilt als die zuverlässigste Quelle zur Entstehungsgeschichte des Cocktails.
Es gibt auch eine alternative Version, die die Kreation einem General Pascal Olivier de Negroni um 1857 in einem Pariser Herrenclub zuschreibt, allerdings mangelt es dieser Theorie an soliden Belegen, und die meisten Cocktailhistoriker halten sie für apokryph oder zumindest mit den verfügbaren Quellen nicht überprüfbar.
Der Negroni wurde schnell von der italienischen Aperitivo-Kultur übernommen und erlangte im 20. Jahrhundert internationale Popularität. Heute zählt er laut Jahresbericht zu den zehn beliebtesten Cocktails der Welt. Drinks International Cocktail Report.